Категории
Производители
Информация
Корзина
Специальные
Хиты продаж
Оптический отраслевой стандарт мутности 5 ЕД и 10 ЕД ОСО Мутности Тарасевича
 Нажмите, чтобы увеличить |
|
Оптический отраслевой стандарт мутности 5 ЕД и 10 ЕД ОСО Мутности
Стандарт мутности (ОСО мутности): 10 ME и 5 МЕ
- НАЗНАЧЕНИЕ: определение мутности бактерийных взвесей методом визуального сравнения.
- АТТЕСТОВАННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА: оптическая плотность 0,46±0,02 (10 Международных единиц мутности, 10 МЕ) и 0,23±0,01 (5 Международных единиц мутности, 5 МЕ) при измерении на КФК-3-«ЗОМЗ» при длине волны (540 ± 3) нм и рабочей длине оптического пути кюветы 5 мм при доверительной вероятности 0,95.
- ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ СВЕДЕНИЯ: ОСО мутности калиброван в соответствии с 5-м Международным стандартным образцом мутности ВОЗ (5th INTERNATIONAL REFERENCE PREPARATION OF OPACITY (5th IRP) WHO NIBSC, LONDON, ENGLAND).
1 Международная единица мутности (1 МЕ) соответствует мутности взвеси коклюшных микробов с концентрацией 1,1 млрд. клеток в 1 мл.
- ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ:
4.1. Перед началом каждого измерения ОСО не резко встряхните, держа его в руке в горизонтальной плоскости до полного исчезновения осадка. Проводите встряхивания в течение 10-15 сек с амплитудой 10-15 см и частотой 1-2 встряхивания в секунду.
4.2. Если в результате встряхивания в пробирке остается видимый глазом осадок или отдельные частицы, то изымите такой стандарт мутности из обращения.
- ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ:
5.1. Поместите исследуемую бактерийную взвесь в пробирку, входящую в комплект ОСО, в объеме 6-7 мл, что соответствует объему наполнения жидкости ОСО.
5.2. Исследуемая бактерийная взвесь должна быть гомогенной, т.е. с равномерным распределением частиц взвеси (микробных клеток) в пробирке.
5.3. Совместите пробирку со стандартом и исследуемой бактерийной взвесью в вертикальном положении на уровне глаз, приложите плотно за ними (по отношению к оператору) сравнительную таблицу и осветите источником рассеянного света таким образом, чтобы пробирки не экранировали друг друга от света. Источником света могут служить: люминесцентная лампа мощностью от 20 до 40 Вт; лампа накаливания матовая или с матовым фильтром (плафоном) мощностью от 40 до 60 Вт, а также - рассеянный дневной свет. Использование прямого солнечного света не допускается.
- ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ
6.1. В случае одинаковой четкости видимых элементов сравнительной таблицы через ОСО и пробирку с исследуемой бактерийной взвесью, мутность их считают одинаковой и равной мутности, указанной на этикетке стандарта.
6.2. Если пункт 6.1. не соблюдается, то мутность в пробирке с бактерийной взвесью не соответствует мутности ОСО. В этом случае измените концентрацию исследуемой бактерийной взвеси до совпадения мутности со стандартом по п. 6.1.
6.3. Погрешность визуального определения мутности с помощью ОСО при остроте зрения оператора 1,0 составляет порядка 10 %.
6.4. Мутность стандарта, эквивалентная 10 МЕ, ориентировочно соответствует следующим концентрациям клеток в 1 мл:
0,93∙109 клеток/мл для микробов кишечной группы;
11∙109 клеток/мл для микробов коклюшной группы;
1,7∙109 клеток/мл для бруцеллезных микробов;
2,2∙109 клеток/мл для холерного вибриона;
5∙109 клеток/мл для туляремийных микробов;
0,95∙109 клеток/мл для чумных микробов;
0,11 ∙109 спор/мл для спор сибиреязвенных микробов.
6.5 Для ОСО 5МЕ концентрация микробных клеток в 2 раза меньше, чем для ОСО 10МЕ.
приготовить микробную взвесь любой концентрации. ОСО мутности 42-28-85 (сер. S-5/1, изг. 02.2014), произведенный по усовершенствованной технологии;
- вакцинные штаммы, используемые при производстве и контроле качества препаратов против ООИ: Yersinia pestis EV, Brucella abortus 19 BА
- вакцина сибиреязвенная живая, лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения и накожного скарификационного нанесения /в комплекте с растворителем – глицерола раствор 30%/ (сер. 253);
- МСО мутности ВОЗ: 5th International Reference Preparation of Opacity, 10 МЕ (5th IRP, 76/522).
Штамм Brucella abortus 19 BА использовали как контрольный образец, для которого известен пересчетный коэффициент (1,7 млрд. м.к./мл).
Подготовка микроорганизмов
Для получения I генерации вакцинного штамма B. abortus 19 BА в ампулы вносили по 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида. После растворения высевали в пробирку со скошенной питательной средой (мясопептонный агар (МПА)). Посевы инкубировали при температуре (37±1)ºС в течение 72±2 ч и хранили при температуре от 2 до 8ºС в течение 3-х мес. Вакцинный штамм B. abortus 19 BА I генерации высевали бактериологической петлей на чашки Петри с МПА. Посевы инкубировали при температуре (37±1)ºС в течение 72±2 ч (II генерация). Полученную культуру использовали для исследований.
Для получения I генерации вакцинного штамма Y. pestis ЕV чумного микроба в ампулы с лиофилизированной культурой вносили по 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида. После растворения высевали в пробирку со скошенной питательной средой (агар Хоттингера). Посевы инкубировали при температуре (27±1)ºС в течение 48±2 ч и хранили при температуре от 2 до 8ºС в течение 3-х мес. Вакцинный штамм Y. pestis ЕV I генерации высевали бактериологической петлей на чашки Петри с агаром Хоттингера. Посевы инкубировали при температуре (27±1)ºС в течение 24±2 ч (II генерация). Полученную культуру использовали для исследований.
Выросшие культуры смывали 0,9% раствором натрия хлорида. Полученные суспензии доводили до мутности 10 МЕ в соответствии с Инструкцией по применению ОСО мутности и МСО ВОЗ.
Вакцина против сибирской язвы представляет собой споровую культуру B. аnthracis, штамм СТИ-1. Подготовку взвеси для оценки концентрации спор в сибиреязвенной вакцине проводили следующим образом: вакцину ресуспендировали в соответствии с НД на препарат [7], затем доводили полученную суспензию до мутности 10 МЕ в соответствии с инструкцией по применению ОСО мутности и МСО ВОЗ (5th IRP).
Инактивацию бактериальных взвесей осуществляли в соответствии с СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)». При отсутствии роста специфических микроорганизмов использовали микробные взвеси в разведении 1:100 для подсчета общей концентрации микробных клеток. Для этого из пробирки с исследуемой взвесью, мутность которой соответствует мутности 10 МЕ ОСО и МСО мутности, делали последовательные десятикратные разведения с помощью 0,9% раствора натрия хлорида.
Подсчет клеток проводили в камере Горяева с помощью микроскопа Axio Scope А1 при 400-кратном увеличении (объектив 40, окуляр 10). Использование фазово-контрастного устройства позволяло исследовать суспензии неокрашенных микробных клеток.
Подсчитывали количество клеток, находящихся в 10 больших квадратах расположенных по диагонали, по 5 в каждой сетке. Осуществляли видеофиксацию изображения каждого исследуемого квадрата с помощью встроенной видеокамеры, затем проводили подсчет клеток в сделанных снимках.
Концентрацию микроорганизмов рассчитывали по формуле:
где k – разведение;
Nср = N / 10 – среднее количество клеток в одном большом квадрате;
v = 0,9 мм3 = 0,0009 мл3 – объем камеры;
n = 225 – количество больших квадратов в камере Горяева.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с применением критерия Стьюдента.
Стандарт мутности можно найти у разных производителей. Его можно приготовить и собственными силами, добавив 0,5 мл раствора дигидрата хлорида бария (BaCl2•2H2O) концентрации 1,175% (вес/объем) к 99,5 мл серной кислоты в концентрации 1% (объем/объем). Примечание: можно также использовать суспензию частиц латекса. После приготовления стандарт мутности разливают порциями (аликвотами) в такие же пробирки, как те, в которых готовят культуру для посева. Чтобы предотвратить испарение, плотно закупорьте пробирки со стандартом МакФарланда и храните их в темноте при комнатной температуре (22–25 °С).
Следует проверить оптическую плотность приготовленного стандарта МакФарланда на спектрофотометре. При длине светового пути (размер кюветы) 1 см и длине волны 625 нм оптическая плотность стандарта МакФарланда 0,5 должна составлять 0,08–0,13. Можно проверить стандарт МакФарланда и другим способом: разведите суспензию контрольного штамма (например, кишечной палочки E. coli ATCC 25922) до такой же мутности, как стандарт, приготовьте серию 10-кратных разведений этой суспензии, высейте разведения на чашки и подсчитайте число колоний на чашках. Суспензия бактерий с такой же мутностью, как стандарт, должна иметь концентрацию 108 колониеобразующих единиц/мл. Проверяйте оптическую плотность стандарта МакФарланда ежемесячно и готовьте новый стандарт, когда потребуется.
Перед каждым употреблениям хорошо потрясите пробирку со стандартом, чтобы взболтать нежный белый осадок сульфата бария, и проверьте суспензию на однородность. Выкиньте стандарт, если он содержит крупные частицы. Суспензию частиц латекса следует перемешивать, аккуратно переворачивая пробирку.
В основе конструирования стандартов лежит оптическая плотность раствора и соответствие её какому-то количеству микроорганизмов, которое определяется соответствующими методиками. Следует иметь в виду, что количество М.О. в единице объёма зависит и от размера микробных клеток. Для энтеробактерий, неферментирующих, стафилококков и ряда других М.О. при практически одинаковой оптической плотности нет существенных различий в количестве М.О. в единице объема. Для грибов рода Candida при 0,5 МакФаланда содержится микробных клеток в 30 раз меньше, чем энтеробактерий.
Ваш отзыв: Заметка: HTML теги не принимаются! Используйте обычный текст.
Рейтинг: Плохо Хорошо
Введите код, указанный на картинке:
